시편제작
5~10 mm3의 목편을 준비하여 필요없는 부위를 제거한 다음 1회용 편면 면도칼로 관찰용면을 깨끗하게 절단하여 시편을 제작하고 그 후 sodium hypochlorite 20% 용액에 시편이 표백될 때까지 침지시켜 불순물을 제거한다.
건조
임계점 건조기에서 건조하거나 덮개를 덮은 상태에서 천연건조를 실시한다.
시료대로의 고정 및 전도성 부여
양면 탄소 점착용 테이프로 시편을 시료대에 고정한 다음 금으로 두께 50 nm가 되도록 sputter-coating한다.
<라디아타소나무 3단면>
투과전자현미경 관찰용 목재 시료 제작법
시편제작
관찰하고자 하는 부위로부터 1 mm3 정도 크기의 작은 목편(木片)을 채취하여 준비한다.
고정
1차 고정 : 0.075M PO4 완충액에 혼합하여 제조한 2.5~3.0% glutaraldehyde 용액(pH 7.2~7.4)으로 시편을 2~3 시간 고정한다.
세척 : 1차 고정된 시편을 0.075M PO4 완충액으로 3회 세척하되 세척은 완충액 1회당 10분간 침지하면 된다.
2차 고정 : 0.075M PO4 완충액에 용해하여 제조한 1.0% osmium tetroxide 용액(pH 7.2~7.4)으로 시료를 2~3 시간 고정한 다음 즉시 완충액으로 세척하거나 또는 완충액에 침지한 상태에서 냉장실에 하룻밤 방치해 둔다.
※ 완충액 제조
용액 A-- Na2HPO42H2O 17.805g을 증류수에 용해하여 500ml의 0.2M dibasic phosphate 을 제조한다.
용액 B-- NaH2PO42H2O 15.605g을 증류수에 용해하여 500ml의 0.2M monobasic phosphate을 제조한다.
pH 7.2의 0.075M PO4 (phosphate) 완충액 제조 : 용액 A 36ml + 용액 B 14ml + 증류수 83ml
※ 2.5 (or 3.0%) glutaraldehyde 용액 제조 : 0.075M PO4 (phosphate) 완충액 45 (또는 44)ml 25% glutaraldehyde 5 (또는 6)ml
1.0% osmium tetroxide 용액 제조: Osmium tetroxide 1g 0.075M PO4 (phosphate) buffer 99ml
탈수
20, 40, 60, 80% acetone 용액에 시편을 각각 10 분간 침지한 다음 100% acetone에 역시 10분간씩 3회 침지시켜 탈수한다.
수지 침투
시편을 vial에 넣은 다음 rotator에서 계속 회전 시키면서 수지를 시편에 침투시키되 아래의 순서를 따른다.
Acetone에 용해하여 제조한 30% Spurr's resin 용액으로 1 내지 여러 시간 처리한 다음 acetone에 용해하여 제조한 75% Spurr's resin 용액에서 하룻밤 처리한다.
또는 Acetone에 용해하여 제조한 30% Spurr's resin 용액에서 하룻밤 처리한 다음 acetone에 용해하여 제조한 75% Spurr's resin 용액에서 1 내지 여러 시간 처리한다.
※ Spurr's resin 용액
--Spurrs resin 배합
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