횡단면, 방사단면 및 접선단면이 명확하게 나타나도록 목편을 제조한 다음 각 단면을 깨끗하 게 절삭한다.
육안이나 돋보기를 이용하여 관찰하기 때문에 그 목재의 특징이 충분히 나타날 수 있는 크기와 형태의 목편을 준비하는 것이 바람직한데 춘재와 추재의 특성 관찰을 위하여는 횡단면과 방사단면에 최소한 2개 이상의 연륜이 포함되어 있어야 한다.
광학현미경 관찰용 목재 시료 제작법
1. 연화
1 x 1 x 1 cm3의 목편 제조후 autoclave에서 연화하되 다음의 방법을 따라 연화한다.
비중 0.5 까지 : 물로 연화함.
비중 0.5~0.7 : glycerine과 물의 1:5 혼합액(부피비)로 연화함.
비중 0.7 이상 : glycerine과 50% ethanol의 1:5 혼합액 (부피비)로 연화함.
※ 연화액에 완전히 가라앉을 때까지 또는 핀셋으로 목편의 상단부를 눌러 보았을 때 목편의 횡단면상에서 조직의 적절한 움직임이 감지될 때까지 연화를 실시한다.
2. 보관
연화가 완료된 목편을 물, ethanol 및 glycerine의 등량 혼합액(부피비)에 충분하게 침지하여 보관하는데 침지기간이 길수록 목편이 부드러워져 박편 절삭이 용이해진다.
3. 박편 절삭
Sliding microtome으로 15~25 ㎛ 두께로 횡단면, 방사단면, 접선단면의 박편을 절삭한 다음 즉시 50% ethanol 용액에 보관한다.
4. 염색 및 탈수
50% ethanol용액의 1% safranin액으로 약 30분 정도 염색한 다음 50, 70, 90, 95, 99% 및 무수 ethanol 순서로 각각 10~20분간씩 탈수하고 ethanol과 xylene의 등량 혼합액(부피비), 순수 xylene에서 각각 10~20 분간씩 투명화 처리하여 탈수를 완료한다.
5. 봉입
Slide glass 위에 탈수 처리를 마친 3단면별 절편을 나란히 올려놓고 xylene에 의해 적절한 점도로 조정된 Canada balsam을 떨어뜨린 다음 기포가 발생하지 않도록 cover glass를 조심스럽게 덮어 완전히 건조될 때까지 방치한다.
<대나무 횡단면상 구조>
<갈매나무 횡단면상의 관공배열>
<스트로부스 잣나무 횡단면상의 압축이상재 조직>
<낙우송 접선단면상의 수지세포 염주상말단벽>
